Hablaremos de los tres pasos mas importantes, en los que la ingenieria Genética juega un papel muy importante, que son: Clonacion de genes, enzimas de restriccion y ADN recombinante.
CLONACION DE GENES.
2.4 Clonación de genes
Todos hemos escuchado alguna ves el termino de clon ya sea en revistas, televisión, libros, etc. Otros con un poco mas de preparación sabemos que es el surgimiento de nuevas especies con el mismo material genético a partir de una célula madre mucho de ellos partiendo de técnicas de ingeniería genética. Así por ejemplo, todas las células bacterianas de una colonia constituyen un clon, ya que proceden de una sola célula. (Van Holde, 2005).
En 1973, Herbert Boyer y Stanley Cohen se dieron cuenta de que podían utilizar las enzimas de restricción para clonar un gen de una manera comparable. Construyeron in Vitro una nueva molécula de ADN formado formada por un fragmento de restricción que contenía un gen de interés, ligado a otra molécula de ADN, como un plasmido, que son moléculas extracromosómico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADN cromosómico. Están presentes normalmente en bacterias, y en algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras. Su tamaño varía desde 1 a 250 kb, capaz de dirigir su propia replicación. Esta molécula podía propagarse biológicamente mediante la introducción en una célula bacteriana.
Cuando la bacteria prolifera, esta molécula de ADN recombinante, que recibe este nombre porque se forma mediante la unión extremo con extremo de dos ADN diferentes, se replica junto con su célula hospedadora.
Boyer y Cohen se dieron cuenta de que, dada la simetría de los lugares de restricción de tipo II, la enzimas que producían cortes escalonados generaban extremos cohesivos que podían juntarse de forma covalente mediante la ADN ligasa. Es posible juntar moléculas de ADN de cualquier origen, siempre que tengan los mismos extremos cohesivos.
La clonación satisfactoria de un requiere de varios electos. En primer lugar, es necesario disponer de un fragmento de ADN que contenga el gen de interés. Generalmente, se trata de un fragmento de restricción.
En segundo lugar es necesario disponer de un vector, es decir, una molécula de ADN en la que se injertara el gen. Un vector puede ser cualquier que contenga un origen de replicación y que pueda replicarse tras su entrada en una célula adecuada (generalmente una bacteriana, aunque los genes se clonan también en células eucariotas) los plasmido y los cromosomas de bacteriófago son los vectores utilizados con mas frecuencia, puesto que pueden replicarse de manera independiente de la célula hospedadora en la que se introducen. Esto permite amplificar el ADN recombinante, esto es, replicarlo en un numero de copias muy superior al del ADN cromosómico.
En tercer lugar, dado que la ligazón y la transformación se producen con una eficacia baja, es necesario disponer de una técnica de detección adecuada, es decir, de un método para identificar las bacterias que contienen el gen clonado, en presencia de una enorme cantidad de células que no lo tienen. Si se prevé que el gen clonado se exprese, pueden seleccionarse unas condiciones en la que el gen clonado confiera a la bacteria receptora un fenotipo seleccionable, como por ejemplo la resistencia a un determinado fármaco o la perdida de un requerimiento nutritivo. (Van Holde, 2005)
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